大家好,關于毛細管等電聚焦電泳很多朋友都還不太明白,不知道是什么意思,那么今天我就來為大家分享一下關于毛細管等電聚焦電泳檢測的相關知識,文章篇幅可能較長,還望大家耐心閱讀,希望本篇文章對各位有所幫助!
CE與質譜。在各種CE與質譜聯用中,毛細管電泳質譜聯用技術最常用。其它如毛細管等電聚焦電泳、膠束電動毛細管色譜、毛細管凝膠電泳、毛細管等速電泳等應用較少。
icief和cief的區別為:性質不同、依據不同、通道不同。
一、性質不同
1、icief:icief是成像毛細管等電聚焦電泳。
2、cief:cief是毛細管等電聚焦電泳。
二、依據不同
1、icief:icief基于不同的蛋白質分子在電場中的遷移速率不同。
2、cief:cief依據樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實現分離。
三、通道不同
1、icief:icief利用玻璃、石英或各種聚合物材料加工微米級通道。
2、cief:cief是以彈性石英毛細管為分離通道。
1、電泳柱效更高,可達105m-1~106m-1,分離速度更快,在幾十秒至幾十分鐘內即可完成一個試樣的分析。
2、溶劑和試樣消耗極少,試樣用量僅為納升級。
3、沒有高壓泵輸液,因此儀器成本更低。
4、通過改變操作模式和緩沖溶液的成分,毛細管電泳有很大的選擇性,可以對性質不同的各種分離對象進行有效的分離。
毛細管電泳法使用注意事項
對于實驗結果的可靠性和重現性,毛細管的沖洗起到了至關重要的作用,每一次沖洗都必須認真地完成,沖洗時間不允許縮短或者不沖洗。
將實驗做完以后一定要使用水對毛細管進行沖洗,不然毛細管可能會被堵塞,使得實驗結果受到嚴重地影響,希望引起足夠的重視。
在對毛細管進行沖洗的時候,不要將電壓加在毛細管上,講義上給定的工作電壓不允許更改,也不建議對進樣時間加以改變。
以上內容參考??百度百科-毛細管電泳法
毛細管區帶電泳(Capillary
Zone
Electrophoresis,
CZE)最常見的模式,用以分析帶電溶質。樣品中各個組分因為遷移率不同而分成不同的區帶。為了降低電滲流和吸附現象,可將毛細管內壁做化學修飾。毛細管凝膠電泳(Capillary
Gel
Electrophoresis,CGE)毛細管凝膠電泳,在毛細管中裝入單體,引發聚合形成凝膠,主要用于測定蛋白質、DNA等大分子化合物。另有將聚合物溶液等具有篩分作用的物質,如葡聚糖、聚環氧乙烷,裝入毛細管中進行分析,稱毛細管無膠篩分電泳,故有時將此種模式總稱為毛細管篩分電泳,下分為凝膠和無膠篩分兩類。膠束電動毛細管色譜(Micellar
Electrokinetic
Capillary
Electrophoresis,MECE)膠束電動毛細管色譜,在緩沖液中加入離子型表面活性劑如十二烷基***鈉,形成膠束,被分離物質在水相和膠束相(準固定相)之間發生分配并隨電滲流在毛細管內遷移,達到分離。本模式能用于中性物質的分離。親和毛細管電泳
(Affinity
Capillary
Electrophoresis,
ACE)親和毛細管電泳,在毛細管內壁涂布或在凝膠中加入親和配基,以親和力的不同達到分離目的。毛細管電色譜
(Capillary
Electrochromatography,
CEC)毛細管電色譜,是將HPLC的固定相填充到毛細管中或在毛細管內壁涂布固定相,以電滲流為流動相驅動力的色譜過程,此模式兼具電泳和液相色譜的分離機制。毛細管等電聚焦電泳(Capillary
Isoelectric
Focusing,CIEF)毛細管等電聚焦電泳,是通過內壁涂層使電滲流減到最小,再將樣品和兩性電解質混合進樣,兩個電極槽中分別為酸和堿,加高電壓后,在毛細管內建立了pH梯度,溶質在毛細管中遷移至各自的等電點,形成明顯區帶,聚焦后用壓力或改變檢測器末端電極槽儲液的pH值使溶質通過檢測器。毛細管等速電泳(Capillary
Isotachophoresis,
CITP)毛細管等速電泳,采用先導電解質和后繼電解質,使溶質按其電泳倘度不同得以分離。
以上各模式以CZE、CGE、MECE三種應用較多。
實驗室中常見的電泳***有以下幾種:
一、紙電泳
指用濾紙作為支持載體的電泳***。是最早使用的區帶電泳。
將濾紙條水平地架設在兩個裝有緩沖溶液的容器之間,樣品點于濾紙中央。當濾紙條被緩沖液潤濕后,再蓋上絕緣密封罩,即可由電泳電源輸入直流電壓(100V~1000V)進行電泳。
二、醋酸纖維素薄膜電泳
電泳時經過膜的預處理、加樣、電泳、染色、脫色與透明即可得到滿意的分離效果。此電泳的特點是分離速度快、電泳時間短、樣品用量少。因此特別適合于病理情況下微量異常蛋白的檢測。
三、凝膠電泳
由區帶電泳中派生出的一種用凝膠物質作支持物進行電泳的方式。
凝膠電泳中的瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳是普通電泳中應用最多的兩種形式。
目前,這種辦法被廣泛用來分析蛋白質和核酸。
四、等電聚焦電泳
1.等電聚焦電泳過程
一種利用有pH值梯度的介質,分離等電點不同的蛋白質的電泳技術。
在一個穩定連續的線性pH梯度的溶液(兩性載體電解質)中進行分離,每一種被分離的兩性物質都移向與它的等電點相一致的pH位置,在那里不再移動(稱為聚焦)。
2.等電聚焦電泳的特點
使用兩性載體電解質,在電極之間形成穩定、連續、線性的pH梯度;
由于“聚焦效應”,即使很小的樣品也能獲得清晰、鮮明的區帶界面;
電泳速度快;分辨率高;
加入樣品的位置可任意選擇;
可用于測定蛋白質類物質的等電點;
適用于中、大分子量(如蛋白質、肽類、同工酶等)生物組分的分離分析。
五、等速電泳
采用兩種不同濃度的電解質,一種為前導電解質,充滿整個毛細管柱;另一種為尾隨電解質,置于一端的電泳槽中。前導電解質的遷移率高于任何樣品組分,尾隨電解質則低于任何樣品組分,被分離的組分按其不同的遷移率夾在中間,在強電場的作用下,各被分離組分在前導電解質與尾隨電解質之間的空隙中移動,實現分離。
六、雙向凝膠電泳(二維電泳)
第一向采用等電聚焦根據復雜的蛋白質成分中各個蛋白質的PI的不同,將蛋白質進行分離。
第二向采用了十二烷基***鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)就是按蛋白質分子量的大小使其在垂直方向進行分離。其結果不再是條帶狀,而是呈現為斑點狀。
七、免疫電泳
免疫電泳是瓊脂平板電泳和雙相免疫擴散兩種***的結合。將抗原樣品在瓊脂平板上先進行電泳,使其中的各種成分因電泳遷移率的不同而彼此分開;然后加入抗體做雙相免疫擴散,把已分離的各抗原成分與抗體在瓊脂中擴散而相遇,在二者比例適當的地方,形成肉眼可見的沉淀弧。
當然是可以的,但是精確度卻不會很高,這是所有電泳實驗共同的瓶頸。一般電泳后的分離成分不是用收集的***鑒定的,因為大分子物質都是微量的,不能以宏觀的角度來研究。不過按照現在的技術水平應該還是可以做到的。
以下是一些資料
毛細管電泳是以彈性石英毛細管為分離通道,以高壓直流電場為驅動力,依據樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實現分離的電泳分離分析***。設備的主要部件有0~30kV可調穩壓穩流電源,內徑小于100μm(常用50~75μm)、長度一般為30~100cm的彈性石英毛細管、電極槽、檢測器和進樣裝置。檢測器有紫外/可見分光檢測器、激光誘導熒光檢測器和電化學檢測器,前者最為常用。進樣***有電動法(電遷移)、壓力法(正壓力、負壓力)和虹吸法。成套儀器還配有自動沖洗、自動進樣、溫度控制、數據采集和處理等
部件。
毛細管電泳所用的石英毛細管柱,在pH值>3的情況下,其內表面帶負電,與緩沖液接觸時形成雙電層,在高壓電場作用下,形成雙電層一側的緩沖液由于帶正電而向負極方向移動,從而形成電滲流。同時,在緩沖溶液中,帶電粒子在電場作用下,以各自不同速度向其所帶電荷極性相反方向移動,形成電泳。帶電粒子在毛細管緩沖液中的遷移速度等于電泳和電滲流的矢量和。各種粒子由于所帶電荷多少、質量、體積以及形狀不同等因素引起遷移速度不同而實現分離。
目前,毛細管電泳的分離模式有以下幾種。
(1)毛細管區帶電泳,用以分析帶電溶質。為了降低電滲流和吸附現象,可將毛細管內壁涂層。
(2)毛細管凝膠電泳,在毛細管中裝入單體,引發聚合形成凝膠,主要用于測定蛋白質、DNA等大分子化合物。另有將聚合物溶液等具有篩分作用的物質,如葡聚糖、聚環氧乙烷,裝人毛細管中進行分析,稱毛細管無膠篩分電泳,故有時將此種模式總稱為毛細管篩分電泳,下分為凝膠和無膠篩分兩類。
(3)膠束電動毛細管色譜,在緩沖液中加入離子型表面活性劑如十二烷基***鈉,形成膠束,被分離物質在水相和膠束相(準固定相)之間發生分配并隨電滲流在毛細管內遷移,達到分離。本模式能用于中性物質的分離。
(4)親和毛細管電泳,在毛細管內壁涂布或在凝膠中加入親和配基,以親和力的不同達到分離目的。
(5)毛細管電色譜,是將HPLC的固定相填充到毛細管中或在毛細管內壁涂布固定相,以電滲流為流動相驅動力的色譜過程,此模式兼具電泳和液相色譜的分離機制。
(6)毛細管等電聚焦電泳,是通過內壁涂層使電滲流減到最小,再將樣品和兩性電解質混合進樣,兩個電極槽中分別為酸和堿,加高電壓后,在毛細管內建立了pH梯度,溶質在毛細管中遷移至各自的等電點,形成明顯區帶,聚焦后用壓力或改變檢測器末端電極槽儲液的pH值使溶質通過檢測器。
(7)毛細管等速電泳,采用先導電解質和后繼電解質,使溶質按其電泳倘度不同得以分離。
以上各模式以(1)、(2)、(3)種應用較多。
電極槽和毛細管內的溶液為緩沖液,可以加入有機溶劑作為改性劑,以及加入表面活性劑,稱作運行緩沖液。運行緩沖液使用前應脫氣。電泳譜中各成分的出峰時間稱遷移時間。膠束電動毛細管色譜中的膠束相當于液相色譜的固定相,但它在毛細管內隨電滲流遷移,故容量因子為無窮大的成分最終也隨膠束流出。其他各種參數都與液相色譜所用的相同。
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